平喘巴布剂药材的提取工艺研究

发布时间:2019-08-28 来源: 历史回眸 点击:


  [摘要] 目的 优选平喘巴布剂药材的提取工艺。 方法 采用L9(34)正交试验法,对药材乙醇提取时间、乙醇用量、乙醇浓度和提取次数等影响因素,以芥子碱硫氰酸盐提取率为考察指标,优选平喘巴布剂药材提取工艺。 结果 最佳提取工艺为用6倍量70%的乙醇回流提取2次,每次2 h。 结论 优选的提取工艺合理,为该复方的透皮吸收特性的研究奠定良好的基础。
  [关键词] 平喘巴布剂;提取工艺;芥子碱硫氰酸盐;正交试验
  [中图分类号] TQ461 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)10(b)-0108-04
  平喘巴布剂源于《张氏医通》,是由芥子、延胡索、甘遂、细辛等几味药材组成,具有利气祛痰散寒逐饮之效,多用于穴位敷贴防治哮喘,属于经皮给药系统,疗效确切,且在临床上具有广泛的应用基础[1-2]。在经皮给药制剂中,确保足够量的药物透过皮肤进入体内达到有效的血药浓度是关键,方中芥子、延胡索、甘遂、细辛的主要活性成分均适合于乙醇提取[3-6],而芥子又为方中君药,主要含季铵盐生物碱芥子碱类成分,广泛存在于十字花科植物中,代表性分是芥子碱,多以硫氰酸盐形式存在,芥子碱硫氰酸盐(Sinapine thiocyanate,ST)具有镇咳、祛痰、平喘、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血压等多种生物活性[3-7]。因此本研究采用正交试验法,以芥子碱硫氰酸盐的提取率为指标,优选药材乙醇提取工艺,确定最佳提取条件,为平喘巴布剂体内外透皮吸收特性的研究奠定物质基础。
  1 仪器与试药
  1.1 药品与试剂
  芥子碱硫氰酸盐对照品(中国药品生物制品检定所,批号:111702-201002);芥子、延胡索、甘遂、细辛等(广州致信中药饮片有限公司);磷酸二氢钾、乙醇为分析纯;甲醇、乙腈为色谱纯;水为怡宝水。
  1.2 仪器
  LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司);高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司);旋转蒸发仪(上海青浦沪西仪器厂);KQ-500型超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);AUW120D精密分析天平(日本岛津公司)。
  2 方法与结果
  2.1 含量测定方法的建立
  2.1.1 色谱条件
  色谱柱:迪马Platisil ODS柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),以Phenomenex为保护柱;流动相:乙腈-0.1 mol/L的磷酸二氢钾=14∶86;检测波长:326 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL。理论塔板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算不低于3000。
  2.1.2 溶液的配制
  2.1.2.1 对照品溶液的配制 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的芥子碱硫氰酸盐对照品5.67 mg,于100 mL的容量瓶中,用流动相溶解制成56.7 μg/mL的对照品溶液。
  2.1.2.2 对照药材溶液的制备 精密称取芥子对照药材细粉1.12 g,置具塞的锥形瓶中,加甲醇50 mL,超声(功率250 W,频率20 KHz)提取3次,每次20 min,滤过,滤液减压回收溶剂至干,残渣用流动相溶解并转移至50 mL的容量瓶中,定容,再用0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
  2.1.2.3 供试品溶液的制备 按照处方比例称取芥子、延胡索、细辛和甘遂,9份,分别按L9(34)正交试验表进行实验,每次提取后趁热过滤,药液用旋转蒸发仪浓缩至药材量1∶1的浓缩液,放至室温后,加水定量至20 mL。然后精密吸取1~9号提取液各0.2 mL,置10 mL的容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,再用0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得1~9号正交试验的供试品溶液。
  2.1.2.4 阴性样品溶液的制备 按处方比例称取除芥子外的其他药材,与供试品溶液同法制备。
  2.1.3 方法学考察
  2.1.3.1 线性范围考察 分别精密吸取上述芥子碱硫氰酸盐对照品溶液2、6、10、15、20 μL进样,测定,以芥子碱硫氰酸盐峰面积积分值为纵坐标,以进样量为横坐标,绘制标准曲线,线性回归分析,得标准曲线方程:Y = 3×106X - 29 592,r = 0.9999。结果表明芥子碱硫氰酸盐进样量在0.1134~1.1340 μg 范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。
  2.1.3.2 精密度试验 精密吸取芥子碱硫氰酸盐对照品溶液10 μL,连续进样6次,测定,按芥子碱硫氰酸盐的峰面积积分值计算RSD为0.58%,表明该仪器具有良好的精密度。
  2.1.3.3 稳定性试验 精密吸取正交试验5号供试品溶液10 μL,分别于0、2、4、8、12 h进样,测定芥子碱硫氰酸盐峰面积,计算其RSD为1.08%,表明样品溶液在12 h内稳定。
  2.1.3.4 重复性试验 取正交试验5号浓缩液,加水定容至20 mL,再精密吸取0.2 mL,5份,按“2.1.2”项下供试品溶液制备方法,制备样品,分别进样10 μL,测定,计算芥子碱硫氰酸盐含量平均值为0.536%,RSD为1.06%。结果表明方法重复性良好。
  2.1.3.5 加样回收率试验 精密吸取正交试验3号提取液0.2 mL,6份,分别加入芥子碱硫氰酸盐对照品溶液0.1、0.2和0.4 mL,置10 mL的容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,再用0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液为加样回收供试液,分别进样测定,计算回收率分别为99.35%(RSD = 2.73%),101.66%(RSD =2.13%),99.76%(RSD = 1.86%)。结果表明,该分析方法的回收率符合要求。
  2.1.4 样品分析

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