云南产青叶胆及其习用品药材中5种成分的HPLC含量测定

发布时间:2019-08-28 来源: 短文摘抄 点击:

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  [摘要] 目的:建立1种用于测定青叶胆及习用品药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和红白金花内酯含量的HPLC方法,并研究5种成分在青叶胆及习用品药材中的分布。方法:Thermo BDS Hypersil C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),流动相0.1%磷酸溶液甲醇,梯度洗脱,流速0.7~ 1.0 mL· min-1,柱温32 ℃,检测波长为250,260,225 nm。结果:5种成分的分离度良好,标准曲线在检测范围内均呈良好线性,r=0.999 7~0.999 9,平均回收率97.03%~102.7%,RSD为1.8%~6.2%。对8种30份青叶胆测定结果显示8个青叶胆品种中5种成分的有无及含量存在差异;弥勒獐牙菜、丽江獐牙菜等獐牙菜苦苷含量高达34.47~118.05 mg·g-1;西南獐牙菜中龙胆苦苷含量最高,紫红獐牙菜中獐牙菜苷的含量较高;根据獐牙菜苦苷及龙胆苦苷与獐牙菜苷含量之和的比较可以鉴别小青叶胆和大青叶胆;根据龙胆苦苷与5成分总和的比值可以区别西南獐牙菜。结论:本研究建立的方法操作简单、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,可用于青叶胆类药材的鉴定及质量评价。
  [关键词] 青叶胆;HPLC;獐牙菜苦苷;龙胆苦苷;獐牙菜苷;芒果苷;红白金花内酯
  [稿件编号] 20121129008
  [基金项目] 国家自然科学基金云南省联合基金重点项目(U0832603);国家杰出青年科学基金项目(81025023);植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室自主课题项目(P2010ZZ08);中国科学院西部之光“西部博士”启动项目
  [通信作者] *陈纪军,Tel/Fax:(0871)5227197,Email: [email protected];*蔡少青,Tel/Fax: (010) 82801693,Email: [email protected] bjmu.edu. cn
  [作者简介] 李耀利,博士,从事生药学研究,Email: [email protected]
  青叶胆来源于龙胆科獐牙菜属植物弥勒獐牙菜Swertia mileensis T. N. Ho et W. L. Shi的干燥全草,为云南特有药材,红河州少数民族用其治疗肝炎有着较悠久的历史,自1977 年起收入《中国药典》,具有清肝利胆、清热利湿的作用,用于肝胆湿热、黄疸尿赤、胆胀胁痛、热淋涩痛[12]。但据文献记载[25]和作者实际调查,弥勒獐牙菜仅分布于弥勒、开远和蒙自等地,资源量少;而獐牙菜属的多种植物,在云南不同地区的民间和制药企业中用作青叶胆。本研究组多年来收集到青叶胆药材多份,经鉴定来源于獐牙菜属植物斜茎獐牙菜S. patens、紫红獐牙菜S. punicea、丽江獐牙菜S. delavayi、西南獐牙菜S. cincta、大籽獐牙菜S. macrosperma和显脉獐牙菜S. nervosa等。来源于紫红獐牙菜的干燥全草称为紫红青叶胆,被2005年版《云南省中药材标准》所收载,用途和用法与青叶胆相同[6]。斜茎獐牙菜的全草以小儿腹痛草之名也收入2005年版《云南省中药材标准》,主治胃痛、腹痛和牙痛等,但在实际中常以青叶胆出售和使用。
  现代药理研究表明,獐牙菜属植物含有的环烯醚萜类(獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷)、NFDE8酮类成分和齐墩果酸等具有保肝利胆作用[712]。本课题组最新研究结果显示红白金花内酯对肝炎病毒表面抗原和肝炎病毒e抗原分泌以及乙型肝炎病毒(HBV) DNA复制均显示较强的抑制活性,具有较强的抗HBV活性[13]。獐牙菜属植物尚做藏茵陈和当药使用[14],故已有不少含量测定报道。高光跃等[15]建立了云南产11种獐牙菜属植物中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷及当药醇苷的高效液相色谱定量分析方法;结果显示,11种獐牙菜均含有獐牙菜苦苷;西南獐牙菜、紫红獐牙菜、大籽獐牙菜中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷含量以龙胆苦苷最高,獐牙菜苷最低;显脉獐牙菜中獐牙菜苷和龙胆苦苷含量较高;但该研究建立的方法流动相复杂,未涉及青叶胆、斜茎獐牙菜、云南獐牙菜和丽江獐牙菜,未测定芒果苷和红白金花内酯。纪兰菊等[16]报道了15种獐牙菜属植物中9种成分的含量,涉及獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷在西南獐牙菜、显脉獐牙菜、斜茎獐牙菜及大籽獐牙菜中的含量;但该研究中样品水浴回流提取时间长达2 h;未见青叶胆、云南獐牙菜、丽江獐牙菜和紫红獐牙菜中各化合物的含量,未测定獐牙菜苷和红白金花内酯。以上2个研究中每种獐牙菜样品仅只有1份,代表性不足。夏从龙等 [17]也对该属一些种的多个成分进行了测定。但是,迄今未见2010年版《中国药典》收载青叶胆的含量测定项;未见云南獐牙菜S. yunnanensis中除芒果苷之外的成分含量测定研究和红白金花内酯在该属植物中的含量报道;未见青叶胆中芒果苷和斜茎獐牙菜中獐牙菜苷的含量报道。
  针对以往研究报道中的这些不足,本研究建立了同时测定青叶胆及习用品种中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和红白金花内酯含量的HPLC方法,并对云南产青叶胆、斜茎獐牙菜、紫红獐牙菜、丽江獐牙菜、西南獐牙菜、大籽獐牙菜、显脉獐牙菜和云南獐牙菜共30份样品进行了含量测定,在比较8个青叶胆品种含量测定结果的同时,建立了鉴定大青叶胆、小青叶胆、西南獐牙菜和紫红獐牙菜的方法。研究结果将为青叶胆及其习用品种的鉴定和质量评价提供科学资料
  1 材料
  Agilent 1100 型高效液相色谱仪,DAD二极管阵列检测器,Agilent Chemistation化学工作站;MilliQ超纯水仪(美国Millipore公司);XS205 dual range 1/10万电子天平(瑞士梅特勒托利多仪器有限公司);KQ500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);WB100型小型高速粉碎机(北京市微博创机械设备有限公司)。

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